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          人成纖維細(xì)胞生長因子8(FGF-8)ELISA檢測試劑盒說明書
          更新時間:2020-12-28瀏覽:1070次

          人成纖維細(xì)胞生長因子8(FGF-8)ELISA檢測試劑盒說明書

          檢測原理

          試劑盒采用雙抗體步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被人成纖維細(xì)胞生長因子8(FGF-8)獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的成纖維細(xì)胞生長因子8(FGF-8)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

          樣品收集、處理及保存方法

          1.  血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

          2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

          3.  細(xì)胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

          4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

          5.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

          自備物品

              酶標(biāo)儀(450nm)
              高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
              37℃恒溫箱

          操作注意事項

                試劑盒保存在2-8℃,使用室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,這屬于正常現(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。
                實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
                標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液即可視為陰性對照或者空白;預(yù)處理后的樣本無需稀釋,直接取10μL加樣即可。
                嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
                所有液體組分使用充分搖勻。

          試劑盒組成:

          名稱

          96孔配置

          48孔配置

          備注

          微孔酶標(biāo)板

          12孔×8條

          12孔×4條

          標(biāo)準(zhǔn)品(160pg/ml

          0.6mL

          0.6mL

          按說明書進行稀釋

          標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

          6mL

          3mL

          樣本稀釋液

          6mL

          3mL

          檢測抗體-HRP

          10mL

          5mL

          20×洗滌緩沖液

          25mL

          15mL

          按說明書進行稀釋

          底物A

          6mL

          3mL

          底物B

          6mL

          3mL

          終止液

          6mL

          3mL

          封板膜

          2

          2

          說明書

          1

          1

          自封袋

          1

          1


          注:標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液依次稀釋為:160、80、40、20、10、5pg/ml

          試劑的準(zhǔn)備

           20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

          洗板方法

                手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。
                自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

          人成纖維細(xì)胞生長因子8(FGF-8)ELISA檢測試劑盒說明書

           

          操作步驟

                從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
                設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
                待測樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;
                隨后標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
                棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機洗板)。
                每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
                每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。

          結(jié)果判斷

           繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:在Excel工作表中,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),對應(yīng)OD值作縱坐標(biāo),繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。

          試劑盒性能

          1.  準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900。

          2.  靈敏度:低檢測濃度小于1.0 pg/ml。

          3.  特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

          4.  重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

          5.  貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

          6.  有效期:6個月

          免責(zé)聲明

          1.   試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或人體實驗,否則所產(chǎn)生的切后果,由實驗者承擔(dān),本公司概不負(fù)責(zé)。

          2.   嚴(yán)格按照說明書操作,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔(dān)。

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