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          實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)板如何選擇!
          更新時(shí)間:2022-03-30瀏覽:3023次

            實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)板如何選擇!

           

            細(xì)胞培養(yǎng)板依底部形狀的不同可分為平底和圓底(U型和V型);培養(yǎng)孔的孔數(shù)有6、12、24、48、96、384、1536 孔等;根據(jù)材質(zhì)的不同有Terasaki板和普通細(xì)胞培養(yǎng)板。具體選擇時(shí)根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞的類型、所需培養(yǎng)體積及不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩ā?/p>

            (一)平底和圓底(U型和V型)培養(yǎng)板的區(qū)別和選擇:

            貼壁細(xì)胞一般用平底培養(yǎng)板。懸浮型細(xì)胞的培養(yǎng)一般用V型。

            U型培養(yǎng)板亦多用于培養(yǎng)懸浮型細(xì)胞 。V型培養(yǎng)板有時(shí)用做免疫學(xué)血凝集的實(shí)驗(yàn)。

            細(xì)胞培養(yǎng)板主要是PS材料。材料是treated sufface。便于細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)與伸展。當(dāng)然還有浮游細(xì)胞的生長(zhǎng)材料,同時(shí)還有l(wèi)ow binding surface,有關(guān)更多實(shí)驗(yàn)材料上的應(yīng)用與對(duì)材料的選擇。

            問(wèn):我想測(cè)吸光度用酶標(biāo)儀,用多孔細(xì)胞培養(yǎng)板行嗎?請(qǐng)問(wèn)酶標(biāo)板 多孔細(xì)胞培養(yǎng)板有什么區(qū)別?

            答:用多空細(xì)胞培養(yǎng)板測(cè)吸光度肯定可以拉,我們經(jīng)常用它來(lái)做樣品的蛋白定量和MTT檢測(cè)。

            區(qū)別:酶標(biāo)板一般要比細(xì)胞培養(yǎng)板貴,細(xì)胞板主要做細(xì)胞培養(yǎng),但也可以用來(lái)測(cè)蛋白濃度;酶標(biāo)板包括包被板和反應(yīng)板,一般不能用做細(xì)胞培養(yǎng),它主要做免疫酶聯(lián)反應(yīng)后的蛋白檢測(cè),它需要更高的要求還需要特定的酶標(biāo)工作液。如下是個(gè)用酶標(biāo)板檢測(cè)冠狀病毒IgM/IgG抗體例子:見網(wǎng)站

            常用不同培養(yǎng)板的孔底面積及推薦加液量:不同孔板所加培養(yǎng)液的液面都不宜太深,一般在2-3mm范圍,結(jié)合不同孔的底面積就可算出各培養(yǎng)孔的適宜加液量。若加液量過(guò)多會(huì)影響氣體(氧氣)交換,而且在搬動(dòng)過(guò)程中易溢出造成污染。具體所加細(xì)胞密度依實(shí)驗(yàn)的目的不同靈活掌握。

            培養(yǎng)器皿 面積(cm2)培養(yǎng)液量(ml) 細(xì)胞量

            96 孔培養(yǎng)板 0.32 0.1 10e5

            24孔培養(yǎng)板 2 1.0 5×10e5

            12孔培養(yǎng)板 4.5 2.0 10e6

            6孔培養(yǎng)板 9.6 2.5 2.5×10e6

            3.5 cm 培養(yǎng)皿 8 3.0 2×10e6

            6 cm 培養(yǎng)皿 21 5.0 5.2×10e6

            10 cm 培養(yǎng)皿 55 10.0 13.7×10e6

            25cm2 培養(yǎng)瓶 25 5.0 5×10e6

            75cm2 培養(yǎng)瓶 75 15~30 2×10e7

            (一)細(xì)胞培養(yǎng)板的密閉和污染問(wèn)題:

            細(xì)胞培養(yǎng)板的加樣和操作:細(xì)胞培養(yǎng)板在進(jìn)行細(xì)胞操作時(shí)同樣遵循嚴(yán)格無(wú)菌的原則,各項(xiàng)操作要保證規(guī)范、科學(xué),不對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)造成額外的影響。這其中最常見的問(wèn)題就是如何保證加樣后細(xì)胞的均勻和盡量減少換液對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)的影響。

            問(wèn):96,24孔培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿的蓋子都很松,這樣是方便了透氣,但是細(xì)菌、霉菌等污染物會(huì)不會(huì)也隨著溜進(jìn)去呢?

            答:1.蓋子很松,屬于半開放培養(yǎng),這樣的目的是透氣(實(shí)際上是為了使培養(yǎng)皿外的co2能夠與培養(yǎng)皿充分交換,維持培養(yǎng)基的pH值)。

            2.凡事有利必有弊,這樣當(dāng)然增加了污染的可能性。此外這樣還會(huì)使培養(yǎng)皿內(nèi)的液體蒸發(fā),這對(duì)于精確定量的藥物來(lái)說(shuō)就顯得值得注意了。所以以下二條措施是必須的a培養(yǎng)箱內(nèi)空氣必須清潔(定期紫外線照,酒精擦洗,盡量少開關(guān)培養(yǎng)箱)b培養(yǎng)箱內(nèi)的濕度必須始終保持為*(培養(yǎng)箱內(nèi)放置無(wú)菌蒸餾水的水槽)。

            (二)細(xì)胞分布不均及解決辦法:

            問(wèn):我的細(xì)胞接種培養(yǎng)板,細(xì)胞總是聚集在周邊部分,該如何處理啊?我看園子里有的戰(zhàn)友的細(xì)胞卻是聚集在中間,是不是板子的質(zhì)量問(wèn)題啊?

            答:請(qǐng)問(wèn)你的細(xì)胞是如何混勻的?是滴管吹打還是振蕩培養(yǎng)板?如果是后者,而且是轉(zhuǎn)圈搖勻的話,很有可能由于離心力的作用使細(xì)胞甩到周邊部分,導(dǎo)致細(xì)胞中間少,四周多!自己可是試試!

            周邊一般是相對(duì)會(huì)多一點(diǎn),但是中間的數(shù)量也不會(huì)很少啊~~ 鋪板的時(shí)候我也沒有特異去振蕩培養(yǎng)板。

            (三)6孔板接種和換液:

            問(wèn):我的細(xì)胞傳代很正常,但一種到六孔板里(不管加藥和對(duì)照),總有兩三個(gè)孔(隨機(jī))細(xì)胞長(zhǎng)得不好,很小,像破碎了。有人遇到過(guò)這種情況嗎?到底是啥原因呢?請(qǐng)各位指點(diǎn)

            答:可能跟你加液的溫度有關(guān)。如果你細(xì)胞剛剛拿出來(lái)?yè)Q液加液,培養(yǎng)基也是從4度冰箱拿出來(lái)不久,很容易細(xì)胞就會(huì)凍死了。建議你最好把培養(yǎng)基先在培養(yǎng)箱里邊孵育15min先。

            (四)24孔板接種:

            問(wèn):我把細(xì)胞消化接種到24孔板之后,已經(jīng)四天了,老是每孔的中間部分長(zhǎng)不滿,每天換液時(shí)都用PBS 清洗,第二天換液時(shí)都出現(xiàn)同樣的情況,每孔的邊緣長(zhǎng)的很好,中央大量死細(xì)胞,是什么原因!

            答:是中央長(zhǎng)不滿,還是中央有和邊緣相同密度的細(xì)胞,但是大部分都是死細(xì)胞?如果是前者,也許不是技術(shù)問(wèn)題,而是物理問(wèn)題了。

            我是選擇孔內(nèi)鋪蓋玻片,在玻片上種植。每次換液都用PBS洗,必要的步驟嗎?另外,也有可能和細(xì)胞種類有關(guān)或者和培養(yǎng)液有關(guān)?

            我想你的培養(yǎng)液可能加的太少了。由于表面張力的作用,培養(yǎng)板的邊緣液體會(huì)向上走,造成培養(yǎng)液面呈現(xiàn)一個(gè)凹面(就像量筒的液體凹面一樣),中央的細(xì)胞正好在凹面的處,培養(yǎng)液少,細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)不夠,甚至干涸掉,空氣中的氧氣也會(huì)造成損傷,即使有增值過(guò)來(lái)的細(xì)胞也會(huì)死掉。

            經(jīng)驗(yàn):

            1.所有待接種的細(xì)胞懸液在種板前一定要用吸管混勻。

            2.按資料記載,24孔板的液體量為1ml,個(gè)人也覺得1ml的量足矣。

            3.接種時(shí),要慢慢加樣,且記得輕微旋轉(zhuǎn)槍頭,這樣做對(duì)細(xì)胞均勻分布有一定效果。

            4.接種后最好直接放入培養(yǎng)箱讓細(xì)胞適應(yīng)培養(yǎng)板這個(gè)新的環(huán)境,個(gè)人認(rèn)為沒有必要在室溫放置一段時(shí)間。

            5.根據(jù)細(xì)胞的特性,細(xì)胞均喜歡聚集在邊緣生長(zhǎng),所以我考慮到,你的問(wèn)題還有可能是接種時(shí)的細(xì)胞密度不夠,導(dǎo)致周邊密集,中間稀疏的錯(cuò)覺。你的拌種密度是多少?

            另"要慢慢加樣,且記得輕微旋轉(zhuǎn)槍頭"的意思就是:加樣不能太快,避免細(xì)胞在一個(gè)加樣處聚集,且注意在不同的部位進(jìn)行加樣,即邊加邊活動(dòng)槍頭,人為使細(xì)胞趨于均勻分布,我個(gè)人覺得有一定的效果,不知這次我解釋清楚沒有。

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